1.什么是蛋白提取?
蛋白质的提取是指将经过处理或破碎的细胞,放在一定的条件和溶液中,让被提取物充分释放出来的过程。
2.为什么要做蛋白提取?
蛋白提取可与不同的下游实验兼容,包括报告基因检测,蛋白质纯化,免疫印迹,免疫沉淀,EMSA(也称 gel shift),footprinting,酶活性分析;
a.ELISA: 将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法;
b.WB: 将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离,再转移到杂交膜(blot)上,然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法;
c.IP/Co-IP: 处于天然构象状态的抗原和抗体之间的反应,而样品处理的质量决定了抗原抗体反应中的抗原的质量,浓度以及抗原是否处于天然构象状态;
d.报告基因检测: 作为报告基因,在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件:①已被克隆和全序列已测定;②表达产物在受体细胞中本不存在,即无背景,在被转染的细胞中无相似的内源性表达产物;③其表达产物能进行定量测定。
3.蛋白提取的方法有哪些?
a.溶液法:如RIPA 裂解液;
b.萃取法:如有机溶剂萃取TCA沉淀;
c.柱式法:离心管柱分离。
4.ExKine™ 总蛋白提取试剂盒
Abbkine ExKine™ 总蛋白提取试剂盒适用于从哺乳动物组织和培养细胞(贴壁或悬浮细胞)中提取全蛋白,配套有蛋白酶抑制剂Cocktail,作用温和,提取过程简便高效。
ExKine™ 总蛋白提取试剂盒试剂盒组分:
• 蛋白提取试剂 (5X)
• 蛋白酶抑制剂 (100×)
ExKine™ 总蛋白提取试剂盒使用中注意事项:
在2-8°C下执行所有步骤。 使用预冷的缓冲液和设备。 确保所有解决方案都是解冻和均匀的。
Abbkine ExKine™ 总蛋白提取试剂盒文献引用:
1.MicroRNA‑301a/ZNRF3/wnt/β‑catenin signal regulatory crosstalk mediates glioma progression
作者:J Sun, Q Ma, C Shu 杂志名称:International Journal of Oncology IF:7.1
2.LncRNA SNHG4 regulates miR-10a/PTEN to inhibit the proliferation of acute myeloid leukemia cells
作者:Yuan Z, Wang W. 杂志名称:Hematology IF:1.472