CD24，也称为热稳定抗原（HSA）或小细胞肺癌簇4抗原，是一种高度糖基化的GPI锚定表面蛋白。它可以与天然免疫细胞上的siglec10相互作用，抑制对感染、脓毒症、肝损伤和慢性移植物抗宿主病的破坏性炎症反应。
为了评估CD24–siglec-10信号在调节巨噬细胞介导的肿瘤免疫应答中的作用，作者检测了CD24和siglec-10在各种肿瘤和相关免疫细胞中的表达。与已知的先天免疫检查点相比，CD24在几种肿瘤中的表达普遍上调（图1a）。按CD24表达分层，CD24表达较低的卵巢癌患者的无复发生存率增加，而CD24表达较低的乳腺癌患者（1b-c）的总体生存优势增加。作者使用六种主要TNB样本的单细胞RNA测序数据研究肿瘤细胞中CD24和Siglec-10的表达。三个阴性乳腺癌（TNBC）细胞显示CD24高表达，而所有其他细胞簇显示较弱的CD24表达，表明CD24可能是肿瘤特异性标记物（图1D）。对原发性人类肿瘤的FACS分析显示，CD24蛋白在乳腺癌细胞和卵巢癌细胞中表达，TAM在所有两种肿瘤类型中均表达Siglec-10（map 1e-f）。
据报道，siglec10可与高度唾液化的cd24相互作用。因此，作者观察到，在表面去硅酰化后，siglec10-fc与MCF-7细胞的结合显著减少(图2g)。这表明，siglecl -10具有识别蛋白质和唾液酸配体的能力，因此可能有多种不同的配体扩展到CD24之外。然而，在没有表面唾液化的情况下，CD24缺失几乎消除了siglec10 – fc的结合，这表明CD24是siglec10的主要蛋白配体(图2h)。自动活细胞显微镜显示，用CD24阻断单抗(克隆SN3)21处理的mcf -7 phrodo – red +细胞更容易被低pH吞噬溶酶体吞噬，随着时间的推移，红色信号增强（图2i）。
同样，基于流式细胞仪的吞噬作用测量显示，与IgG对照相比，添加抗cd24单抗后，吞噬作用显著增加，大于用CD47阻断观察到的效果(图3a)。CD24阻断剂增强了所有表达CD24的癌症的吞噬作用，包括乳腺癌(MCF-7)、胰腺癌(Panc1)、胰腺神经内分泌肿瘤(APL1)和小细胞肺癌(NCI-H82)，而对CD24细胞(U-87 MG)无影响（图3b）。基因缺失导致对CD24阻断反应显著降低，表明抗CD24单抗特异性干扰CD24- siglec10信号(图3c)。CD24的表达与对CD24阻滞的反应以及基线吞噬作用水平相关，表明CD24的组织特异性表达是主要的“don’t eat me”信号，并突显了CD24表达作为先天性抗氧化剂的预测指标的潜在价值肿瘤免疫反应（图3d）。从转移性卵巢癌患者中收集卵巢癌细胞，并用抗CD24 mAb处理，以测量原发性人类肿瘤的吞噬作用（图3e）。在这些情况下，CD24阻断产生的作用明显大于CD47阻断，并且CD24和CD47阻断抗体的双重治疗至少会加重吞噬作用（图3f）。
为了研究是否可以在体内概括针对CD24赋予的抗吞噬作用的保护作用，将GFP-荧光素酶+ MCF-7 WT或MCF-7ΔCD24细胞移植到NOD.Cg-Prkdc SCID Il2rg tm1Wjl / SzJ（NSG）小鼠中。在数周内，作者观察到与WT肿瘤相比，ΔCD24肿瘤的肿瘤生长显着减少（图4a-b）。TAM的耗竭并没有显着改变WT肿瘤的负担，而TAM的丧失在很大程度上消除了在ΔCD24肿瘤中观察到的肿瘤生长的减少，这表明增加的TAM介导的ΔCD24细胞清除率是减轻肿瘤负担的原因（图4b）。吞噬清除率提高导致的这种生长差异为移植有CD24缺陷肿瘤的小鼠带来了显着的生存优势（图4c）。为了证明可以通过治疗性阻断CD24来调节抗肿瘤免疫力的增强，将具有已建立的MCF-7 WT肿瘤的NSG小鼠用抗CD24单克隆抗体治疗2周。与IgG对照相比，抗CD24单药疗法显着降低了肿瘤的生长（图4d）。
抗CD24 mAb对人的潜在脱靶作用包括B细胞耗竭，这是由于B细胞的CD24高表达所致。确实，在用抗CD24单抗治疗后，可以观察到健康B细胞的吞噬作用清除（扩展数据图10a）。但是，作者发现与抗CD47 mAb 4不同，抗CD24 mAb并未显示出可检测到的与人红细胞（RBC）的结合，尽管小鼠CD24a是由小鼠RBC表达的（扩展数据图10b）。CD24的高表达可能会抑制对依赖巨噬细胞功能的疗法的反应，因此CD24的表达可能对现有免疫疗法的反应性具有直接的预测价值。发现弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者中CD24和CD47的表达呈负相关（扩展数据图10c）。
总结
总的来说，这项工作将CD24–Siglec-10定义为对调节抗肿瘤免疫至关重要的新型先天免疫检查点，并为CD24阻断的治疗潜力提供了证据，特别是有望治疗卵巢癌和乳腺癌。
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