【菌物学入门】化学试剂、参考文献

今天解答一下之前评论里的问题~

(最近up比较忙,学业上事情比较多,暂且先把这些问题解答掉,等以后有空把菌物学里的其他各个方面讲一下,带大家入门菌物学hhh

 

1.化学反应和试剂

在进行蘑菇鉴定时经常用到各种各样的试剂。这些试剂的成分有时邪门到让你怀疑早期的菌物学家可能都是化学大佬…

up本人是业余爱好者,没接触过很多试剂,家中常备的试剂仅有KOH溶液。下面都是我的个人理解,如有误欢迎指出:

(一)碱溶液

  • 配方:碱(氢氧化钾KOH,氢氧化钠NaOH等可溶性碱)、蒸馏水

  • 浓度:2%-10%

  • 来源:可以在淘宝购买配置好的溶液。也可以购买碱自行配置,蒸馏水可以用屈臣氏。

  • 用途:碱试法、标本复水、显微观察

  • 建议常备。最常用5%KOH水溶液。

碱溶液很容易购买,用途也很多,既可用于宏观观察,也可用于显微观察。

宏观上,将碱溶液滴加在子实体上的不同部位,可能出现阳性的变色反应(变黄、变绿、变橙、变紫…),若不变色则为阴性,这种方法称为碱试法。碱试法的阳性或阴性可以作为鉴定特征(尤其是在蘑菇属Agaricus物种中,子实体对KOH的反应是重要的分组特征),

显微上,在显微观察干标本时最好先将干标本切片置于KOH溶液中,进行复水,使标本部分恢复到干燥前的状态(如果复水效果不佳,可换用浓度更高的溶液,但最好不要超过10%),然后将KOH溶液滴加在载玻片上进行显微观察;因为碱性溶液具有滑腻感,滴加在切片上可以还充当润滑剂,使各个显微结构滑开,方便观察;一些蘑菇的组织在KOH中会变色,也可以作为鉴定特征。如果观察的是新鲜标本,无需进行复水,且可直接使用蒸馏水滴加在载玻片上。

 

(二)梅氏试剂Melzer’s Reagent

  • 配方:碘0.5g、碘化钾1.5g、蒸馏水20-22ml、水合三氯乙醛(Chloral hydrate)20-22。将碘化钾先溶解在少量蒸馏水里,加入碘并搅拌至完全溶解,然后加入剩余的蒸馏水和水合三氯乙醛。

  • 浓度:按配方配置

  • 来源:一般人搞不到的,放弃吧

  • 用途:检验孢子或组织的质地

  • 保存:最好保存在棕色试剂瓶中

  • 只能用于显微观察

梅氏试剂一般用于检验蘑菇的组织或孢子质地。它基本只能用于显微观察浅色调组织或孢子,往载玻片上的孢子或组织切片滴上一滴,等待一段时间后放到显微镜下观察,如果变蓝色调则为“淀粉质amyloid(也可能是假淀粉质)“,如果变红色调则为“类糊精质dextrinoid”,不变色则为“非淀粉质inamyloid”。这些组织的质地可以辅助蘑菇鉴定。

如果组织或孢子本身有颜色,则不能使用梅氏试剂,因为变色现象很难观察。

梅氏试剂一般人很难制备,主要问题是配方中的水合三氯乙醛既有毒还有挥发性,普通人是无法获得的。有一种梅氏试剂的替代品叫鲁哥氏碘液Lugol’s Reagent,就是将配方中最后那个邪门的东西去掉,不过有研究表明鲁哥氏碘液和梅氏试剂对同一种蘑菇的反应效果可能存在差异,因此鲁哥氏碘液还不能完全替代梅氏试剂。

Up的个人感觉是,梅氏试剂一般的爱好者不需要准备,在鉴定作用不太大;只有在面对特定类群(如鹅膏属),或是面对完全没有鉴定方向的物种时,或在面对存放很久,干燥变形的标本时,才一般考虑组织或孢子是否淀粉质这个特征。

 

(三)刚果红Congo Red和甲酚蓝Cresyl Blue

  • 配方:色素(刚果红或甲酚蓝)、蒸馏水

  • 浓度:1%(每1g色素溶解在99ml蒸馏水中)

  • 来源:可以在淘宝上买到色素,自行加蒸馏水(屈臣氏)调配

  • 用途:染色孢子

  • 保存:长期保存最好保存在棕色试剂瓶中

  • 可以准备也可以不准备,显微观察比较有用

这些是显微观察时染色用的色素,将其配置成浓度1%的溶液,然后滴加在组织切片或孢子上。可以让轮廓更加清晰,以便测量孢子或菌丝长度、宽度等数据。甲酚蓝还可以观察担子菌的担孢子壁是否分层(部分物种的内孢壁遇甲酚蓝会变红)。

(四)Schaeffer’s Cross Reaction

  • 原料:苯胺、浓硝酸

  • 来源:一般人搞不到的,放弃吧

  • 用途:可能出现显色反应,可用于蘑菇鉴定

主要用于蘑菇属Agaricus物种。在菌盖表皮上滴加一条苯胺,然后再在垂直方向上滴加一条浓硝酸,形成一个x形。等待几分钟,若交界处变色(如亮橙色、亮红色,偶尔深紫红色)则为阳性,不变色或缓慢变褐则为阴性。Schaeffer’s Cross Reaction的阳性或阴性,是鉴定蘑菇属物种的重要特征。

鉴于苯胺和浓硝酸都是有危险性的化学物且很难买到,因而有人提出了一种替代品:将4-苯胺磺酸水溶液直接滴加在蘑菇菌盖上,或将4-苯胺磺酸溶解在3%KOH溶液中,然后再滴加25%的醋酸,据说效果和Schaeffer’s Cross Reaction相同。

测试可以在干标本上进行,但效果和新鲜时可能存在差异。

 

(五)浓硫酸Concentrated Sulphuric Acid

  • 配方:kk鲨鱼 字面意义的浓硫酸H2SO4

  • 浓度:>70%

  • 来源:kk鲨鱼 一般人搞不到的,放弃吧

  • 用途:识别部分小脆柄菇科物种,如小脆柄菇属Psathyrella。

  • 只能识别小脆柄菇,真的没啥用

部分小脆柄菇科物种遇浓硫酸孢子会褪色,而在其他相似的深色孢子类群中一般不会褪色。

危险系数大,且完全可以依靠其他特征来识别小脆柄菇科,不建议使用。

 

(六)硫酸香草醛溶液Sulpho-vanillin

  • 配方:纯净香草醛(香兰素)0.5g,蒸馏水2ml,纯净硫酸4ml。建议先将香草醛溶解在乙醇中,再缓慢加入蒸馏水和硫酸。

  • 浓度:按配方配置

  • 来源:一般人很难搞到

  • 用途:鉴定红菇属物种

主要用于红菇属Russula物种。红菇属一些物种的新鲜菌肉会在此溶液中变红褐色、黄褐色、紫褐色等,可以作为鉴定依据;如果滴加在子实体上各部位,等待约5分钟,也可以将对应部位的囊状体染色,方便显微观察。

有一定危险性,制备后需过滤再使用(不要傻到用滤纸过滤——仔细读读试剂名称前两个字,请用玻璃棉过滤),不能用于干标本。

硫酸香草醛溶液仅在鉴定红菇属物种时有用——但红菇是个天大的坑,往往你有了硫酸香草醛溶液,依然鉴定不出任何红菇属物种。没有必要准备。

 

(七)氨水Ammonia

  • 浓度:5-50%

  • 来源:较低浓度可直接在淘宝购买,高浓度一般人难获得

  • 用途:可能出现显色反应,可用于蘑菇鉴定

  • 有臭味、有毒性,不建议使用

较低浓度的氨水可以在宏观上让一些蘑菇的菌肉变色(如各类牛肝菌),50%的氨水能让一些蘑菇的囊状体、菌盖表皮变色。

氨水有难闻的气味,具有危险性,且平时也不常使用,可以不准备。如有需要,可以在淘宝上直接购买配置好的低浓度氨水。

 

(八)硫酸亚铁溶液Ferrous sulphate(Iron Salt)

  • 配方:硫酸亚铁(FeSO4),蒸馏水

  • 浓度:10%

  • 来源:分析纯硫酸亚铁可以在淘宝上购买(最好不要用花肥硫酸亚铁),蒸馏水用屈臣氏代替

  • 用途:可能出现显色反应,可用于蘑菇鉴定

  • 不经常使用,可以不准备

硫酸亚铁溶液滴加在一些蘑菇的菌盖、菌柄或菌肉上可能会出现变柠檬黄色、橄榄绿色、蓝绿色、粉色、灰色或其他颜色等现象。

偶尔将硫酸亚铁直接敷在蘑菇上也能造成变色。

 

(八)Wieland Test(Meixner Test)

将菌肉碾碎,放在报纸上并滴加一滴浓盐酸。若蘑菇中含鹅膏毒肽或裸盖菇素,则报纸上会变橄榄绿色调。

反应要点是要用低质量的报纸,因为鹅膏毒肽、浓盐酸和报纸中的木质素反应并生成绿色物质,而高质量的纸中木质素含量更少。具体的反应原理未知。裸盖菇素也能反应并造成假阳性。

我国学者在2021年基于这种反应开发了鹅膏毒肽快速检测试剂盒,可用于中毒患者的食物残渣检测等。

 

2.如何寻找蘑菇相关资料?

不要用百度百科。Up个人推荐bing国际版(最好有一定英语基础),不需要翻墙,可以很方便搜索国内国际各种丰富的资源。Bing上还能搜到不少精美的蘑菇照片。

 

蘑菇科普网站:

Mushroom Expert、Ultimate mushroom guide等都是很好的蘑菇科普网站,能找到很多蘑菇的介绍和简单描述(当然,以国外蘑菇为主)。

不过,这些网站上对蘑菇的形态描述往往很简略,想要更深入地了解某个类群,需要阅读相关文献。

 

搜索参考文献:

国内文献可以在知网、万方、维普或百度文库等上搜索。但是这些网站上往往不会提供文献全文,而只提供摘要(abstract),全文需要到道客巴巴、稻壳浏览器等去寻找。

国外文献可以在Google Scholar(国内可以用镜像网站)、Web of science上搜索,或者直接在bing国际版上搜索。同样,找到想要的文章后如果找不到全文,则需要复制文章名称到Researchgate, Pubmed, Scihub等提供免费全文的网站上寻找。外文文献往往比国内文献资料更丰富。

假设我想了解  近年在我国发表的鹅膏属Amanita物种:

首先,到Google Scholar镜像网站(up用的是http://scholar.scqylaw.com/)上搜索。关键词可以是Amanita China New species (鹅膏属 中国 新物种)等。

我们看中了第一篇文章,点进去看看:

可以看到,网站上只展示了文章的摘要,想要找到全文必须付款。白嫖文章可以去Researchgate、Scihub、Pubmed等网站。

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