影响细胞培养结果的因素有很多,培养基是细胞体外生长的营养环境,决定了培养体系的优劣,培养基中的一项重要辅料为牛血清。
细胞培养中常用的牛血清是一种组分复杂且尚不完全明确的混合物,含有上千种蛋白质,提供细胞生长所需要一些生长因子、激素、贴附因子和营养物质。通常在基础细胞培养基中添加 5%~10% 的牛血清用于细胞培养。
小牛血清?胎牛血清?新生血清?
细胞培养究竟用哪个?
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使用注意事项
Q:胎牛血清的试用范围?
适用于一般细胞,肿瘤细胞,部分干细胞等。
Q:如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?
血清解冻时应将血清从-15~-70℃的低温冰箱中取出放入4℃冰箱解冻1天,待全部解冻后再分装。解冻过程中请不时摇匀(小心勿造成气泡),使血清成分和温度均匀,从而减少沉淀的产生。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻,并避免反复冻融。需要长期保存的血清必须储存于-20℃ – -70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中的有效成分会被破坏,而影响血清质量。
Q:有时在血清中见到的絮状沉淀可能是些什么物质?
主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量,可用400 xg离心5 min去除,也可不用处理。
Q:如何避免血清中产生沉淀?
(1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
(2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。
(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
(4) 勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。
(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
(6) 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。
Q:在使用前是否需要对血清进行过滤?
一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接过滤血清。
Q:自然溶化好的胎牛血清放在室温下一晚还能用吗?
室温不可以,建议4℃保存。
Q:热灭活对血清的作用是什么?
不是必须的,看做什么实验。如果用于培养普通细胞,血清一般是不需要灭活的,这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞,如内皮细胞,血清是需要灭活,一般是56℃,30min。Q:加到培养基中的血清必须灭活吗?
热灭活步骤能够灭活补体系统。补体会参与以下事件中:溶解细胞事件,平滑肌收缩,肥大细胞与血小板释放组胺,吞噬作用增强,趋化作用,淋巴细胞与巨噬细胞的活化等。Q:细胞培养 中出现黑点是污染吗?如何处理?
一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:
(1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;
(2)血清质量不好,反复冻融的结果;
(3)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;
(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;
(5)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。Q:细胞培养中如何防止黑点生成?
(1) 尽可能地减少血清冻融次数。
(2) 培养基无需37℃水浴。
(3) 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2。
(4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。
(5) 掌握细胞传代的最佳时机,细胞切勿生长过老。