TA克隆连接接头法是目前NGS文库构建流程中DNA文库的主要方法之一。TA克隆连接接头法主要包括以下流程。
01DNA的片段化
DNA片段化的经典方法之一是使用超声设备对DNA进行物理打断。机械打断DNA的方法均匀性好，但是对DNA样本的损伤较大，且通量较低，仪器和耗材的成本也较高。
另一种打断DNA的方法是使用片段化酶对DNA进行均匀的打断。这种打断无需特殊设备，使用方法简单且通量较高，是目前热门的DNA片段化方式。
爱博泰克（ABclonal ) 提供DNA
Frag Module（Cat.No.RK20260），这种片段化模块可以通过控制反应时间来达到不同的片段化效果。
图1.
Human Blood gDNA使用DNA
Frag Module打断不同时间后的文库构建片段大小
02末端修复与加A
通过物理或酶切的方式将提取好的DNA片段化后，这些DNA片段仍不可以进行接头连接步骤，原因在于：打断过程产生的DNA片段，有的是平末端，有些是粘性末端，且其末端不一定存在磷酸基团或者羟基基团。
平末端经过加A步骤后就可以与带有突出T的接头进行连接了，而粘性末端，还需要补齐后才可以进行加A。
爱博泰克（ABclonal )可以提供末端修复和加A过程中所需要的一系列原料酶，例如Klenow片段化酶（Cat.No.RK20525）、Taq
DNA聚合酶（Cat.No.RK20600）等。
图2.末端修复与加A的流程
03TA接头连接
经过片段化、末端修复与加A步骤后，DNA片段的结构变成了3’端带有A尾的结构。以常见的Y型接头示意，Y型接头的互补3’端带有突出的T，DNA片段与接头在DNA连接酶的作用下，通过TA克隆方式完成连接。爱博泰克（ABclonal )可提供这一步的关键酶——T4
DNA连接酶（Cat.No.RK21500）。
图3.常规Y型接头示意图
04PCR扩增
在完成接头连接后，如果Y型接头是带有Index的完整型长接头，且文库产量满足上机测序需求的情况下，可以不进行文库扩增；如果使用的是不带有Index的截短型接头，还需要使用带有Index序列的Primer对文库进行富集，才可以进行后续的上机测序步骤。
爱博泰克（ABclonal )可以提供多种NGS场景使用的PCR
Mix，欢迎咨询、试用和购买。
图4.全长型接头与截短型接头引入Index的方式
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ABclonal
公司简介
爱博泰克生物科技有限公司（ABclonal Technology Co.,Ltd.）成立于2011年，作为生命科学解决方案的提供商，旨在为更多的科研工作者、IVD企业、新技术开发企业提供抗体、酶、NGS产品和蛋白制品等全套解决方案。