蛋白质生物特征复杂、不同蛋白质的数量分布跨度大、目前无直接信号放大的检测技术，不仅给低丰度蛋白的检测提出挑战，也限制了蛋白质检测技术往更全面检测方向的发展。
AOCs（Antibody−oligonucleotide conjugates）是一类抗体与寡核苷酸偶联合成的新型嵌合生物分子，将抗体特殊的靶向识别能力与寡核苷酸在检测、治疗、成像和材料学等方向的功能相结合，目前已成为检测、成像和治疗药物开发方向的有力工具。
抗体结合PCR实现对免疫信号极灵敏的放大作用，为实现高灵敏、多通道的蛋白质检测提供可能。
图1. 抗体-寡核苷酸偶联物（AOCs）示意图
抗体-寡核苷酸偶联物（AOCs）应用现状
免疫PCR（Immuno-PCR，iPCR）
免疫PCR是在ELISA的基础上建立起来的，使用PCR扩增代替ELISA的酶催化底物显色反应。通过DNA聚合酶将AOCs的DNA分子标签特异性放大，与传统ELISA相比，iPCR至少可使抗体检测的灵敏度提高1000倍。
图2. 免疫PCR原理示意图
邻位连接分析技术（PLA）和邻位延伸分析技术（PEA）
PLA技术通过一对标记有DNA寡核苷酸的单克隆或者多克隆抗体的探针（PLA探针）识别目的蛋白，当这两个探针识别同一个蛋白时，探针之间的距离靠近，产生了邻近效应。
接着，通过荧光PCR实现多种检测寡核苷酸的杂交，可在显微镜下观察、并量化。以Olink公司的PEA技术通过使用DNA聚合酶规避了PLA中DNA连接酶在血浆中的使用缺陷，当结合在同一蛋白上的抗体相互靠近时其DNA寡核苷酸互补配对并结合DNA聚合酶，使用qPCR或二代测序对DNA寡核苷酸定性定量。
图3. PLA与PEA原理示意图
免疫HCR（Immuno-hybridization chain reaction，iHCR）
免疫HCR规避了PLA和PEA对酶依赖性，通过使用共价连接寡核苷酸引发剂的抗体识别靶蛋白，接着用一对带有荧光标记的互补的发夹式寡聚物进行选择性和特异性的等温无酶延伸，该方法能够捕获从单个细胞分泌的细胞因子，并将灵敏度平均提高200倍。
图4. 免疫HCR原理示意图
多重免疫组化与单细胞蛋白组
将标记特异性DNA寡核苷酸标签(Barcode）的抗体与样本共孵育，通过二代测序识别DNA Barcode的种类或者添加荧光标记的与Barcode互补的寡核苷酸探针，实现对组织或细胞中蛋白指标的同时检测及分析。
表1. 多重免疫组化与免疫荧光技术比较
近年来以10X为代表高通量单细胞检测技术，已成功将AOCs应用于单细胞膜蛋白检测以及多样本标记的混样检测，为单细胞蛋白组检测提供可能。
图5. AOCs在单细胞表面蛋白检测中的应用
ABclonal抗体-寡核苷酸偶联物（AOCs）技术服务介绍
ABclonal整合自身优秀的抗体和分子酶团队，推出抗体-寡核苷酸偶联物（AOCs）技术服务，欢迎各位老师咨询，期待与您的合作！
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